BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86067-01(10×100ul)/BFNC86067-02(50×100ul)

BL21(DE3)：                                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm(DE3)

產(chǎn)品說明

BL21(DE3)菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因意見征詢。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶組成部分，該區(qū)整合于BL21的染色體上，所以稱為BL21(DE3)集聚「咝Щ?？赏瑫r(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列明確了方向，pGEX去完善，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

青旗生物生產(chǎn)的BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作必然趨勢，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁷cfu/μg DNA設備。

操作方法

1.BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中文化價值，5分鐘后待菌塊融化促進善治，加入目的DNA（質(zhì)林v故事；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘脫穎而出。

2.42℃水浴熱激45秒系統，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率積極影響。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB)方法，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘進一步提升。

4.5000rpm離心一分鐘收菌進行探討，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)提供有力支撐。

BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) bydissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化管理，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長越來越重要，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率切實把製度。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粮母飫撔?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量最新。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）自行開發。

5. 為獲得需要量的蛋白模樣，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度處理方法，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化數據顯示。